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慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)的制備程序
點(diǎn)擊次數(shù):1067 更新時(shí)間:2020-01-08

慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)方法構(gòu)建含有目的基因的慢病毒表達(dá)載體(GeneCopoeia可提供各種慢病毒載體的ORF、啟動(dòng)子、shRNA、miRNA前體和miRNA抑制劑克?。┘?xì)胞準(zhǔn)備:細(xì)胞傳代后,密度達(dá)到70%左右時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染;轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備:取兩個(gè)EP管,一個(gè)(A管)加入慢病毒載體的表達(dá)質(zhì)粒、混合包裝質(zhì)粒和Opti-MEMI;另一個(gè)(B管)加入Opti-MEMI、轉(zhuǎn)染試劑,一邊輕柔渦旋A管,一邊往A管滴加B管的溶液。溶液混合后,室溫放置10-25分鐘,即完成轉(zhuǎn)染復(fù)合物的制備。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染:將混合液逐滴加入細(xì)胞培養(yǎng)皿中,混勻后孵育;收集病毒:轉(zhuǎn)染后48h、72h收集含慢病毒的上清;
慢病毒包裝及檢測(cè)工具:1.慢病毒包裝工具細(xì)胞293Ta(LT008);2.慢病毒包裝試劑盒(LT001);3.慢病毒濃縮試劑盒(LT007)